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生化胺基酸與蛋白質：結構、功能與代謝107-2 年 第79題

一蛋白質混合液含有A和B兩種形狀相似的蛋白質，A之分子量 = 45000 Da，等電點（pI）= 5.8，B之分子量 = 45500 Da，pI = 8.5。下列那一項技術最適用於分離A和B蛋白質？

A.分子大小排除法（size exclusion chromatography）
B.離子交換層析法（ion exchange chromatography）✓ 正解
C.SDS-聚丙烯醯胺膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）
D.超高速離心（ultracentrifugation）

詳解

AI詳解（AI 生成僅供參考）

離子交換層析法利用蛋白質等電點不同時所帶電荷差異進行分離，是分離兩種蛋白質最有效的方法。 **A. 分子大小排除法** - 不適合。A和B分子量相差僅500 Da（45000 vs 45500），差異不到1.2%，凝膠層析法無法有效區分如此接近的分子量。 **B. 離子交換層析法** - 正確答案。A的pI=5.8，B的pI=8.5，等電點差異達2.7個單位，相當顯著。在pH 6.5～7.5的緩衝液中，A呈負電，B呈正電，利用陰離子交換或陽離子交換樹脂可有效分離兩者。 **C. SDS-聚丙烯醯胺膠電泳** - 不適合。SDS-PAGE會破壞蛋白質的天然結構，且根據分子量分離，而A、B分子量幾乎相同，電泳無法有效區分。 **D. 超高速離心** - 不適合。需要蛋白質分子量差異大（通常需>10%），才能根據沉降係數差異進行分離，A和B差異過小。

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